目的 探讨microRNA-140（miR-140）对胃癌细胞SGC-7901侵袭能力的影响及其调控机制。 方法 将miR-140 mimics（miR-140）、miR-140特异性抑制剂（Anti-miR-140）和针对HDAC4的 siRNA（HDAC4 siRNA）分别通过脂质体转染至细胞，应用荧光定量qRT-PCR检测细胞中miR-140和HDAC4 mRNA表达情况，Western blot分析HDAC4蛋白水平。采用Transwell小室模型检测miR-140上调和下调以及HDAC4调低对SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 MiR-140转染可使HDAC4蛋白表达降低，HDAC4 mRNA水平则无明显变化。MiR-140上调与HDAC4调低均可显著抑制SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力，而转染了 Anti-miR-140的SGC-7901细胞中HDAC4 蛋白表达增高，细胞迁移和侵袭能力增强。 结论 MiR-140在转录后水平调控HDAC4表达。MiR-140抑制胃癌细胞迁移和侵袭能力，部分是通过下调HDAC4而实现。MiR-140 可能作为肿瘤转移诊断及治疗的新靶点。

目的 探讨肿瘤转移抑制候选基因（MTSS1）在胃癌组织中的表达水平及对胃癌细胞增殖凋亡的作用。方法 Western blot检测收集的胃癌组织及对应的癌旁组织中?MTSS1蛋白表达水平。通过细胞转染的方法将过表达载体pEGFP-N1-MTSS1、空载体pEGFP-N1 转染至胃癌细胞中，MTT检测48h的细胞增殖情况，流式细胞术检测48h的细胞凋亡情况，Western blot检测48h细胞中?Cleaved Caspase-3、HES1、NICD1、NICD2蛋白表达水平。胃癌细胞与NOTCH信号通路抑制剂S2188作用48h后，检测细胞凋亡及细胞中?Cleaved Caspase-3、HES1、NICD1、NICD2蛋白表达水平。结果 胃癌组织中MTSS1蛋白水平明显低于癌旁组织（P<0.01）。pEGFP-N1-MTSS1组细胞存活率明显低于pEGFP-N1组（P<0.01）。pEGFP-N1-MTSS1组细胞凋亡率明显高于pEGFP-N1组（P<0.01）。pEGFP-N1-MTSS1组细胞中Cleaved Caspase-3表达水平明显高于pEGFP-N1组（P<0.01）。pEGFP-N1-MTSS1组细胞中HES1、NICD1、NICD2表达水平明显低于pEGFP-N1组（P<0.01）。NOTCH信号通路抑制剂S2188作用后的胃癌细胞凋亡及蛋白表达趋势与pEGFP-N1-MTSS1组细胞相一致。结论 MTSS1在胃癌组织中表达下调。MTSS1能促进胃癌细胞凋亡，抑制胃癌细胞增殖，作用机制与NOTCH信号通路有关。

目的 探讨 miRNA-186 上调 Dicer1 的表达影响胃癌细胞侵袭和迁移的作用机制。方法 取 40 例胃

癌患者的胃癌组织及相应的癌旁组织；将转染 pLVTHM-mimic-miRNA-186 和 pLVTHM-mimic-NC 的慢病毒感染

液分别转染 BGC-823 细胞，得到过表达 BGC-823-mimics-miRNA-186 细胞、阴性对照 BGC-823-mimics-NC 细胞。

定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测不同组织和细胞中miRNA-186的相对表达量；Transwell小室检测细胞

侵袭能力，划痕实验检测细胞迁移能力；间接免疫荧光法（IFA）检测 Dicer1 相关分子神经型钙黏蛋白（N-cadherin）的阳性表达情况，双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-186和Dicer1的靶向关系，Western blot检测各细胞

Dicer1 的相对表达量。结果 胃癌组织中 miRNA-186 的相对表达量明显低于癌旁组织（P﹤0.01）。胃癌细胞

BGC-823 和 BGC-823-mimics-NC 中 miRNA-186 的相对表达量均明显低于正常胃黏膜上皮细胞 RGM-1，且 BGC-

823-mimics-miRNA-186 细胞中 miRNA-186 的相对表达量明显高于胃癌细胞 BGC-823 及 BGC-823-mimics-NC，差

异均有统计学意义（P﹤0.01）。BGC-823-mimics-miRNA-186 细胞侵袭数目少于胃癌细胞 BGC-823 和 BGC-823-

mimics-NC，细胞迁移率低于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。过表达

miRNA-186 的 BGC-823-mimics-miRNA-186 细胞中 N-cadherin 阳性表达率低于胃癌细胞 BGC-823 和 BGC-823-

mimics-NC（P﹤0.05）。mimics-miRNA-186能明显抑制野生型psi-CHECK-Dicer1-wild的荧光素酶活性，而对突变

型 psi-CHECK-Dicer1-mutant 的荧光素酶活性无明显影响。胃癌细胞 BGC-823 和 BGC-823-mimics-NC 中 Dicer1

蛋白的相对表达量均明显低于正常胃黏膜上皮细胞 RGM-1，且 BGC-823-mimics-miRNA-186 细胞中 Dicer1 的相

对表达量明显高于胃癌细胞 BGC-823 和 BGC-823-mimics-NC，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。结论 miRNA-

186通过靶向正调控Dicer1的表达，下调N-cadherin的表达可抑制胃癌细胞的侵袭和迁移能力。

目的 探讨胃癌细胞中TWIST慢病毒表达载体的构建及构建。方法 参考Genbank的人TWIST基因序列设计出1对TWIST全基因扩增引物，从人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增TWIST基因，聚合酶链反应（PCR）产物线性化克隆入慢病毒表达载体GV341中，构建重组载体GV341-TWIST。将重组载体GV341-TWIST转染至人胃癌293T细胞包装病毒，免疫荧光检测293T细胞形态改变，蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞TWIST表达水平，实时PCR法检测病毒滴度。结果 成功构建了GV341-TWIST慢病毒表达载体，经限制性酶切后出现651 bp的条带，DNA测序分析证实重组慢病毒载体GV341-TWIST的插入序列有近100%的正确率，重组慢病毒载体转染293T细胞后，Western blot检测TWIST融合蛋白为25 kD。实时PCR测定重组慢病毒载体GV341-TWIST病毒滴度2.00E+8 TU/ml。结论 本实验成功构建了人重组慢病毒载体GV341-TWIST慢病毒表达载体，在人胃癌293T细胞中高效表达了TWIST蛋白。