2022 年第 18 期 第 20 卷

胃癌细胞中TWIST慢病毒表达载体的构建及鉴定

作者：郭雪艳，蔺敏，刘贵生，金燕，阎春英，高淑娟

单位：1.陕西省人民医院消化内科2.宝鸡市人民医院呼吸内科

关键词：TWIST 慢病毒载体 胃癌

• 摘要：
• 【摘要】目的 探讨胃癌细胞中TWIST慢病毒表达载体的构建及构建。方法 参考Genbank的人TWIST基因序列设计出1对TWIST全基因扩增引物，从人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增TWIST基因，聚合酶链反应（PCR）产物线性化克隆入慢病毒表达载体GV341中，构建重组载体GV341-TWIST。将重组载体GV341-TWIST转染至人胃癌293T细胞包装病毒，免疫荧光检测293T细胞形态改变，蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞TWIST表达水平，实时PCR法检测病毒滴度。结果 成功构建了GV341-TWIST慢病毒表达载体，经限制性酶切后出现651 bp的条带，DNA测序分析证实重组慢病毒载体GV341-TWIST的插入序列有近100%的正确率，重组慢病毒载体转染293T细胞后，Western blot检测TWIST融合蛋白为25 kD。实时PCR测定重组慢病毒载体GV341-TWIST病毒滴度2.00E+8 TU/ml。结论 本实验成功构建了人重组慢病毒载体GV341-TWIST慢病毒表达载体，在人胃癌293T细胞中高效表达了TWIST蛋白。